염기성 화합물 분석

염기성 화합물 분석방법에는 ① 이동상의 pH를 알칼리성으로 두고 Protonation을 완전히 억제하는 방법. ② 이동상의 pH를 산성으로 두고 대립 이온 시약을 사용하는 이온 페어링 법이 있습니다. 하지만 ①의 방법은 조제하는 이동상의 pH(pK0+2)가 C18충진제를 사용할 수 있는 pH 범위를 벗어나는 경우가 많아 범용성이 떨어집니다. ②의 방법은 이온 페어링제인 알킬산에 따라 유지가 좌우되며, 물질원의 유지력을 없애 버립니다. 따라서 유사한 구조의 물질을 한 번에 분석할 경우에는 적합하지 않습니다. 또한, 이온 페어링 법은 검량 선의 직선 영역이 좁다는 점과 이온 페어링제가 용해되는 시약 용매에 한정되는 문제점도 있습니다.

LC/MS

LC/MS의 염기성 화합물 분석에는 ① 이동상의 pH를 강알칼리성으로 두고 Protonation을 완전히 억제하는 방법. ② 이동상의 pH를 산성으로 두고 대립 이온 시약을 사용하는 이온 페어링법이 있습니다. ①의 방법은 위와 동일하게 이동상의 pH에 제한이 있습니다. ②의 방법은 pH를 낮추기 위해 이동상에 Trifluoroacetic acid, Formic acid 혹은 Acetic acid를 첨가합니다.
Trifluoroacetic acid의 경우 이온 페어링을 형성해, 유지는 늘어나나 검출 감도가 낮아진다고 알려져 있습니다. Formic acid, Acetic acid를 첨가할 경우 Protonation으로 인해 염기성 물질을 충분히 유지할 수 없어 유지 측면에서 문제가 발생하기도 합니다.

더욱 좋은 염기성 화합물 분석방법으로서 중성 조건 하에서의 분석에 주목

중성 조건 하에서의 분석

염기성 화합물을 중성 조건 하에서 분석할 수 없는 이유가 있습니다. 바로 잔존 실라놀기의 영향입니다. 이동상을 중성 조건으로 설정하면 충진제의 봉쇄되지 않은 잔존 실라놀기의 영향이 가장 커집니다. 이로 인해 염기성 화합물을 분석할 경우 흡착 혹은 피크의 테일링 등의 현상이 발생하며 회수율이나 휘발성 및 재현성의 저하 등의 문제가 발생합니다.

만약, 이러한 중성 조건에서 분석이 가능하다면…
예를 들면, LC/MS 분석에서 일반적으로 사용되는 초산암모늄(중성)을 사용한 염기성 화합물 분석이 가능해지는 등 다양한 장점이 있습니다. 이를 현실로 만든 것이 세계 최고 수준의 실라놀기 봉쇄를 실시한 「CAPCELL PAK C18 MGII」입니다.

장점 1. 염기성 화합물 분석 시 적정한 pH를 검토하여 이동상을 산성 혹은 강알칼리성으로 설정할 필요가 없어져 조건을 검토하는 번거로움이 사라집니다. 또한, 데이터의 재현성이 향상됩니다.
장점 2. 산성 및 알칼리성에서의 안정성이 낮은 샘플도 중성 조건에서 분석이 가능해집니다.
장점 3. LC/MS 분석에서는 이동상에 사용할 수 있는 염이 한정되어 있습니다. 그중에서도 일반적으로 사용되는 산성 암모늄이 중성이므로, 중성 조건에서의 염기성 화합물 분석은 매우 유효한 방법이라 할 수 있습니다.
장점 4. LC/MS 분석 시 감도에 영향을 미치는 이온화 효율은 이동상 조건에 따라 크게 달라집니다. 이로 인해 염기성 화합물을 중성 조건에서 분석할 수 있게 된다는 것은 조건 설정에 폭이 넓어진다는 것을 의미하며, 다양한 조건의 검토가 가능해집니다.